2R-1. 원핵세포에서 Chromosomal DNA와 Plasmid DNA의 형태학적인 차이점을 설명하라.
1) Chromosomal DNA 의 구조
: 원핵세포의 chromosomal DNA는 불규칙한 모양으로 핵양체(nucleoid)라는 부분에 모여 있다. 대부분의 원핵세포는 단일한 고리 모양의 이중나선 DNA(deoxyribonucleic acid)를 지니지만 어떤 세균은 선형 DNA를 염색
다. Amino Acid의 Titration과 pH buffer 작용
Amino Acid를 NaOH와 같은 염기로 Titration을 하여 얻어지는 Titration Curve는 적정하는 Amino Acid의 pH buffer 작용을 잘 설명해 준다.
즉 Amino Acid의 Carboxyl기는 Weak Acid이므로 NaOH-와 같은 Strong Base와 반응하면 일정한 pH 범위 내에서 큰 pH 변화를 일으키지 않는 pH Buffer 작용을 한
Amino Acid의 Titration과 pH buffer 작용
Amino Acid를 NaOH와 같은 염기로 Titration을 하여 얻어지는 Titration Curve는 적정하는 Amino Acid의 pH buffer 작용을 잘 설명해 준다.
즉 Amino Acid의 Carboxyl기는 Weak Acid이므로 NaOH-와 같은 Strong Base와 반응하면 일정한 pH 범위 내에서 큰 pH 변화를 일으키지 않는 pH Buffer 작용을 한다는
1. 핵산이란?
1) 핵산의 정의
핵산이란 모든 생물의 세포 속에 존재하는 고분자 유기물의 일종을 말하며, 1869년 스위스의 생물학자 F.미셔에 의해 발견되었다. 미셔는 백혈구에서 핵 성분을 분리 추출하여 분석한 결과 강한 산성을 나타내며, 인 성분을 함유하는 유기화합물이 들어 있음을 알아 냈다.
Alkaline lysis method
- 세포의 cell wall과 cell membrane을 부수고 DNA만을 분리하는 방법
- Chromosomal DNA 와 plasmid의 고유한 형태 구조 차이를 이용 !
; Chromosomal DNA - 상대적으로 size가 크고, double heilx
Plasmid - size가 작고, supercoiled 형태 -> pH에 변화에 의한 변성↓
Alkaline Lysis Method
DNA gel electrophoresis(전기영동)
- DN
chromosomal DNA나 전염성 병원체의 DNA 또는 RNA로부터 제조한 complementary DNA(cDNA), plasmid DNA 등을 쓸 수 있다. 불순물이 섞여 있으면 반응을 억제할 수 있으므로, 가능한 정제하여 사용하는 것이 좋으며, 정제가 안 된 경우에는 불순물의 양이 적을 때에는 반응이 충분히 일어나지 않고, 양이 많으면 비특이적
double-standed DNA)이다
2)세포내에서 염색체 DNA와는 별개로 존재
3)자기 스스로 복제가 가능
4)대부분 세균에 존재하나, 일부 진핵세포에도 존재
5)복제기점(DNA 복제의 시작점으로 숙주 범위 및 plasmid DNA의 copy를 결정)이 존재한다
6)항생제 저항성 유전자(R인자)를 가진다.
7)다중 제한효소 클로닝 부
있다.
2.실험원리
DNA와 plasmid의 고유 형태구조 원리에 의한 분리 방법으로써 세포내에 DNA는 일반적인 double-helix의 형태를 가지는 반면 plasmid는 supercoiled형태를 가짐으로써 PH변화에 따라서도 plasmid의 형태와 구조가 크게 변하지 않아 순수한 plasmid만을 추출하는 구조적 기본원리에 의한 방법이다.